人雄激素受體 (AR) ELISA 試劑盒對(duì)溫育的時(shí)間和溫度有著嚴(yán)格的要求。所有試劑在使用前必須達(dá)到室溫 20 - 25℃,這一溫度范圍能夠確保試劑的活性和反應(yīng)的準(zhǔn)確性。例如,有研究表明,在該溫度范圍內(nèi)進(jìn)行溫育,能夠使檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性提高到 90% 以上。使用后立即冷藏保存試劑,可以有效延長(zhǎng)試劑的使用壽命,同時(shí)保持其活性。
嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行溫育也是至關(guān)重要的。不同的步驟可能需要不同的溫育時(shí)間,如在加入標(biāo)準(zhǔn)品及檢測(cè)樣本到反應(yīng)孔中后,封板后于 37℃孵箱孵育 90min,加入化抗體工作液后溫育 60min,加入酶結(jié)合物工作液后溫育 30min 等。這些時(shí)間的設(shè)定是經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的,能夠確保反應(yīng)充分進(jìn)行,從而得到準(zhǔn)確的結(jié)果。
如果不嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育,可能會(huì)導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。例如,溫育時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)使反應(yīng)過度,導(dǎo)致結(jié)果偏高;溫育時(shí)間過短則可能使反應(yīng)不充分,結(jié)果偏低。溫度過高或過低也會(huì)影響試劑的活性,從而影響檢測(cè)結(jié)果。
為了確保溫育操作的規(guī)范性,在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)使用精確的溫育設(shè)備,如恒溫箱。同時(shí),要定期對(duì)溫育設(shè)備進(jìn)行校準(zhǔn),以確保溫度的準(zhǔn)確性。在溫育過程中,還應(yīng)避免頻繁打開溫育設(shè)備,以免影響溫度的穩(wěn)定性。
二、洗板操作不容忽視
洗板不正確會(huì)致結(jié)果不準(zhǔn)確,加底物前盡量吸干孔內(nèi)液體,防止微孔干燥。
洗板操作在人雄激素受體 (AR) ELISA 試劑盒的使用過程中至關(guān)重要。如果洗板不正確,會(huì)導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。例如,在進(jìn)行手工洗板時(shí),若未能吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,或者在浸泡孔內(nèi)時(shí)時(shí)間不足、注入的洗滌液量不夠等,都可能使殘留的雜質(zhì)影響后續(xù)反應(yīng),從而導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差。有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,洗板可能使結(jié)果的誤差率增加 20% 以上。在加入底物前,一定要確保盡量吸干孔內(nèi)液體,這是因?yàn)闅埩舻囊后w可能會(huì)與底物發(fā)生非特異性反應(yīng),影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí),溫育過程中要防止微孔干燥,一旦微孔干燥,可能會(huì)使試劑在孔壁上的分布不均勻,從而影響反應(yīng)的進(jìn)行。
為了確保洗板操作的正確性,可以采用手工洗板和自動(dòng)洗板機(jī)洗板兩種方法。手工洗板時(shí),要嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行,先吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,然后在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,將酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,再將推薦的洗滌緩沖液至少 0.3ml 注入孔內(nèi),浸泡 1 - 2 分鐘,根據(jù)需要重復(fù)此過程數(shù)次。
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